В геном микобактерии

В преддверии больших событий принято подводить промежуточные итоги. Накануне съезда фтизиатров России подвели их и специалисты Центрального НИИ туберкулеза РАМН. О том, какие фундаментальные исследования приходят на помощь практическому здравоохранению, мы беседуем с директором Центрального НИИ туберкулеза РАМН членом-корреспондентом РАМН Владиславом ЕРОХИНЫМ.

- Владислав Всеволодович, хорошо известно, что ваш НИИ, являясь академическим институтом, акцентирует внимание на фундаментальных исследованиях. Что нового появилось в знаниях о возбудителе туберкулеза?

- В межсъездовский период были получены новые данные о микобактериях туберкулеза, в том числе и нашими учеными. Расшифровка генома МБТ открыла большие возможности изучения генов, контролирующих разные стороны жизнедеятельности МБТ, в том числе связанных с формированием лекарственной резистентности, по существу, ко всем противотуберкулезным препаратам.

Проведен анализ точечных мутаций в этих генах, в них выявлены кодоны с наибольшим числом мутаций. На основании полученных данных по спектру мутаций в генах, ответственных за устойчивость, например к рифампицину и изониазиду - основным противотуберкулезным препаратам, созданы биочипы (совместно с Институтом молекулярной биологии им. В.А.Энгельгардта), позволяющие в течение 1-2 дней получить результаты по устойчивости МБТ к этим препаратам. Причем, что особенно важно, - непосредственно из мокроты, то есть диагностического материала. Микрочиповая технология выявления ЛУ МБТ имеет важное практическое значение, ведь позволяет не только обнаружить возбудитель туберкулеза, но и определить его чувствительность к основным противотуберкулезным препаратам, а следовательно, провести нужную коррекцию химиотерапии больного и повысить эффективность лечения.

Перспективными являются исследования по определению ЛУ МБТ на биочипах к противотуберкулезным препаратам II ряда и фторхинолонам.

Другое направление молекулярно-генетических исследований МБТ (генотипирование по методу молекулярного фингерпринта) позволяет решать вопросы по выявлению источника и путей трансмиссии МБТ, в том числе с МЛУ. Установлено большое разнообразие генетических групп МБТ, циркулирующих в территориях России, и преобладание штаммов семейства «W», обладающих повышенной (но не тотальной) вирулентностью и МЛУ. В неблагополучных по туберкулезу территориях России распространение W-штаммов доходит до 60%.
 
Исследованиями на культуре макрофагов, выполненными учеными института (Л.Черноусова и соавт.) показано, что МБТ W-семейства отличаются высоким уровнем синтеза РНК и способностью к выживанию в макрофагах. Это свидетельствует о том, что МБТ еще не исчерпали все возможности своего генома для адаптации к условиям существования.

В лаборатории генетики института получены новые данные по иммунопатогенезу туберкулеза. Установлено, что популяция иммунных лимфоцитов CD4 состоит из двух типов клеток, отличающихся наличием или отсутствием на клеточной поверхности рецептора CD27 (из семейства рецепторов к фактору некроза опухолей). Важным является тот факт, что переход от фенотипа CD27+ к фенотипу CD27-происходит в легочной ткани. Только CD27- продуцируют большое количество интерферона-гамма, активирующего макрофаги (С.Апт и соавт.). Высокое содержание в легких CD27- коррелирует с более благоприятным течением туберкулеза. Эти результаты получены впервые в мире.

- Результаты каких фундаментальных научных исследований, выполненных учеными института, уже нашли или находят внедрение в практику?

- Еще раз подчеркну большое значение молекулярно-генетических исследований МБТ, результаты которых послужили основой для разработки методов ускоренного выявления и определения лекарственной устойчивости МБТ на основе создания микрочипов.

Другой пример. Сурфактант и сурфактантная система легких, обладающие уникальными свойствами влияния на механику дыхания, активность макрофагов, мукоцилиарный клиренс, обладают противо-отечным и антиателектатическим действием. Доказана ее важная роль в патогенезе туберкулеза, возможности формирования сурфактантзависимых ателектазов и других осложнений при дефиците сурфактанта у больных туберкулезом легких. Обоснована целесообразность применения активаторов выработки сурфактанта и препаратов сурфактанта, например сурфактанта-BL, созданного в С.-Петербурге, для повышения эффективности лечения, включая и хирургическое (Л.Лепеха, О.Ловачева, О.Розенберг и др.).

Приоритетными являются фундаментальные исследования МЛУ-форм туберкулеза, особенно остропрогрессирующих, механизмов взаимодействия макроорганизма и МЛУ МБТ. Новым направлением, получившим развитие в ЦНИИ туберкулеза РАМН, является изучение механизмов резистентности клеток макроорганизма к противотуберкулезным препаратам.

У нас впервые во фтизиатрии начаты исследования влияния трансплантации клеток костного мозга на течение экспериментального туберкулеза (Л.Поспелов, В.Гергерт). Впервые в мировой практике в ЦНИИТ произведена трансплантация собственных мезенхимальных стволовых клеток больным тяжелым, прогрессирующим туберкулезом легких (И.Васильева, В.Чуканов, А.Конопляников). Получены положительные результаты, анализ и оценку которых еще предстоит сделать. Данные исследования открывают новые возможности для применения клеточных технологий в клинике туберкулеза.

- Ведутся ли в институте какие-либо исследования по противотуберкулезным вакцинам?

- Да, проводятся. ЦНИИТ является региональным центром ВОЗ по изучению новых противотуберкулезных вакцин на животных. Проведено тестирование вакцин, полученных в разных лабораториях мира и принадлежащих к разным классам: субъединичные белковые и пептидные вакцины с адъювантами, вакцины, созданные на основе белков культурального фильтрата МБТ, комплексные вакцины на основе дендритных клеток и ДНК-вакцины (Т.Кондратьева, Э.Рубакова, А.Апт). Многие из них создают специфический протективный иммунитет, достоверно увеличивающий срок жизни животных при заражении МБТ. Исследование новых вакцин является актуальным и перспективным направлением.

У нас имеются достижения во фтизиохирургии, фтизиопедиатрии, разработке новых схем химиотерапии с применением различных патогенетических средств, экстракорпоральных и лазерных технологий, и все они направлены на повышение эффективности лечения больного туберкулезом.